단백질 구조를 확인하기 위해 매핑되는 펩타이드

이 방법은 프로테아제 또는 화학 제품에 의한 단백질의 분열 뒤에 적절한 분석 방법에 의해 단백질의 제 1차 구조의 완전성과 정확도를 확인합니다.

첫번째 방법 : 트립신 박리 - 반전상 고성능 액체 크로마토그래프

고성능 액체 크로마토그래프에 의해 결정됩니다.

색층 분석 조건 : 단백질과 펩티드 분석을 위한 충전기로서의 옥틸실란 사로잡힌 실리칼 겔 또는 옥타데실실레인 결합 실리칼 겔 : 아세토니트릴에서 0.1% 트리플루오로아세트 산에서 이동 전화 위상 A로서의 이동성 위상에서 0.1% 트리플루오로아세트 산 해결책이 모바일 위상 B였고 흐름 속도는 1이었고 밀리람베르트 매분과 증감이 70 분당 동안 녹여서 분출되었습니다 (해결책 A를 위한 100% 내지 30%와 해결책 비 동안 0 내지 70%로부터).

칼럼 온도 : 30 'Ｃ ± 5 'Ｃ,

보존과 테스트 샘플 저장 온도 : 2~ 8 'Ｃ,

검출 파장 : 214nm,

검사 방법 : 각각 1% 중탄산나트륨 솔루션 가득 찬 투석을 사용함으로써 처리된 (또는 서열 분석 순수한) 트립신이 1 밀리람베르트마다 0.1 마그네슘을 포함하는 해결책에 소실되기 위해 1% 중탄산나트륨 솔루션을 추가합니다] [톨루엔설포닐닐알라닐 클로로네 케톤을 시험 솔루션과 기준 용액으로 데려가기 위해 1시 50분 (마그네슘 / 마그네슘)을 트립신액에 더하고 37 16시간에서 24 시간 동안 'Ｃ에 있는 인큐베이션 뒤에 신맛난 50%를 추가한 데 시험 솔루션과 기준 용액이 (모두 라이머들 당 1 마그네슘 해결책, 만약 테스트 샘플과 참조의 집중이 충분하지 않으면, 그것이 상응하는 집중에 집중되어야 합니다) 필요하세요 1시 10분에 있는 산성 용액과 5 분 동안 10,000 rpm에 있는 원심분리기. (또는 0.45 μm 필터를 침투하 )와, 정확하게 표면에 뜨는 물질 중 100 μl을 잡고, 액체 크로마토그래프에 투여하고, 증감에서 용리하고 크로마토그램을 기록하세요. 시험 솔루션의 지도는 기준 용액의 지도와 비교해서 있습니다.

두번째 방법 : 브롬화시안 박리

검사 방법 : (단백질의 50μg에 대하여) 테스트 샘플과 기준 물질의 적절한 양을 잡고 16시간 동안 물로 투석되고, 프에제-드라이 브롬화시안 용해물을 추가하 [브롬화시안 0.3g를 심사숙고하고 포름 산 (70%를 추가하고 - 100%) 1 밀리람베르트는 왼쪽으로 24시간 동안 실온에, 20 μl에 용해되었고 용해물이 동결건조를 뒤이어 물 (180 μl)로 추가되었습니다. 냉동건조된 용해물은 적정 농도에 오염으로 재구성됩니다. 전기영동은 (20% 호화) SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동에 의해 실행되고 은염색법으로 얼룩졌습니다. 테스트 샘플을 참고 지도와 비교하세요.